Velevi Pharma - Gerisan, Laksilin, KoKoBo, Gerimak, Barsa, ApergaVelevi Pharma - Gerisan, Laksilin, KoKoBo, Gerimak, Barsa, ApergaVelevi Pharma - Gerisan, Laksilin, KoKoBo, Gerimak, Barsa, ApergaVelevi Pharma - Gerisan, Laksilin, KoKoBo, Gerimak, Barsa, ApergaVelevi Pharma - Gerisan, Laksilin, KoKoBo, Gerimak, Barsa, ApergaVelevi Pharma - Gerisan, Laksilin, KoKoBo, Gerimak, Barsa, Aperga

Радиопротективный эффект полифенолов герани кровяной

РАДИОПРОТЕКТИВНЫЙ ЭФФЕКТ ПОЛИФЕНОЛОВ ГЕРАНИ КРОВЯНОЙ /GERANIUM SANGUINEUM - L/
Георги Велев, Ст. Иванчева 1, Р. Лазаров 2

Ботанический институт при БАН /Болгарская Академия Наук/, Клиника по радиологии при НОЦ /Национальный онкологический центр/. Antiradiation effect of poliphenols from Geranium sanguineum - L. G. Velev, St. Ivancheva, R. Lazarov 2.
Botanical Institute Bulgarien Academy of Sciences, Department of radiology of NOC.

Использование биологически активных веществ из натуральных продуктов дает современной фармакологии новые возможности. А именно, создавать альтернативу синтетическим препаратам, которые обыкновенно очень токсичны. Известны синтетические радиопротекторы, такие как  WR- 2721, ОК-78 /5/. Не случайно в аптеках в США более 70% предлагаемых препаратов имеют природное происхождение. Защита  организма человека и животных от ионизирующих излучений интересует ученых еще со дня их открытия. Радиомодифицирующий эффект ряда природных продуктов является предметом изучения многих авторов. /1,2,3,4/. Эти препараты входят в программу массовой профилактики людей, работающих в среде ионизирующих излучений.

GS это лиофильный субстрат настоя из корневища герани кровяной /GeraniumSanguineum- L/. Он представляет комплекс полифенольных соединений со следующим процентным соотношением между компонентами: танины /20-30%/, флавоноиды /0.03-0.08%/, катехины и проантоцианидины /0.15-0.25%/, полифенольные кислоты /0.01-0.02%/ и балластные вещества /7/. Получение настоя происходит в следующем порядке: корневища хорошо высушиваются до 12 % влажности, мелко раздробляются до величины частицы 0.5 мм и проводится экстракция с этиловым спиртом. Из-за того, что биологически активные составляющие являются термолабильными, сушка производится через лиофилизацию при температуре 350-40° С. Полученная субстанция порошкообразная, красно-коричневого цвета и хорошо растворяется в воде и спирте.  

Задача настоящего исследования - оценка радиопротекторных возможностей полифенолов, содержащихся в стандартном препарате GS, полученном из корневищ герани кровяной. Для достижения цели использована стандартная радиобиологическая методика выживания грызунов, анализ на лейкоциты, гранулоциты, лимфоциты и тромбоциты перифирической крови крыс, фагоцитарная активность нейтрофилов, исследование основных клеточных популяций онкологических больных, которым проводится лучевая терапия.

МАТЕРИАЛЫ  И МЕТОДЫ
   1. Опытные животные
Опыты на выживаемость, эндогенные селезёночные колонии /Е - КОЕ g/ и фагоцитарную активность нейтрофилов были проведены с белыми беспородными мышками мужского пола с телесной массой 20-25 g. Исследование периферических показателей крови было проведено на крысах породы "Вистар", мужского пола, с телесной массой 150 -170 g.
Клиническое испытание GS проводилось в НОЦ /Национальный онкологический центр/ на онкологических больных, которым проводилась лучевая терапия. Группа состояла из 12 человек, а контрольная группа из 11.

   1. Применение препарата.
Опытным мышкам 5 дней подряд перед облучением вводился через металлический зонд водный раствор лиофилизата в дозах 30 mg/kg телесной массы. Для крыс делалось то же самое, но в дозах 5 mg/kg телесной массы. Больные онкологическими заболеваниями пациенты принимали его  «per os» в форме капсул на голодный желудок по 150 mg в день /~2.5 mg/kg/, начиная за 10 дней до начала облучения и продолжая прием  в течение целого курса лечения.
Облучение. Мышки были облучены 10 Gy  гамма-облучателем "Луч - 1300" с четырьмя источниками, 60Co и мощностью 1.3 u/мин. Крысы "Вистар" были облучены 4 Gy тем же гамма-облучателем.
Для больных онкологическими заболеваниями был проведен курс лечения ионизирующим излучением в конвенциональных дозах и объеме.

ЭКСПЕРИМЕНТЫ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ГРУППЫ
Для наблюдения выживаемости мышей, остро облученных 10 Gy гамма-лучами, мы использовали четыре группы, состоящие из 20 экспериментальных животных.
Первую группу мы поили с помощью металлического зонда раствором GS в дозе 30mg/kg  пять дней подряд  перед облучением. Профилактическая схема приложения.
Вторая группа принимала ту же дозу пять дней подряд, но после облучения. Терапевтическая схема приложения.
Обе контрольные группы мы поили дистиллированной водой – одну до, другую после облучения - параллельно с подопытными группами.
Прослеживание показателей крови в динамике мы осуществили в двух группах крыс породы "Вистар", причем одну группу мы поили раствором лиофилизата GS пять дней подряд до облучения 4 Gy гамма лучами с дозой 5 mg/kg телесной массы, а контрольную группу - дистиллированной водой. Мы проследили лейкоциты, гранулоциты и лимфоциты. Проследили мы и тромбоциты в динамике.
Онкологические больные, у которых мы прослеживали основные лейкоцитные популяции, во время проведения лучевой терапии и приёма в качестве радиопротектора GS, составляли группу численностью 12 человек - 6 мужчин и 6 женщин. Их средний  возраст равнялся 47.3 г. По нозологическим единицам они были распределены следующим образом: четыре пациента проводили лечение по поводу болезни Ходжкина, четыре - по поводу опухоли в матке, по одному имели опухоли  ректума, легких, назофаринкса и мозга. В контрольной группе четыре пациента имели болезнь Ходжкина, двое – не с лимфомами Ходжкина, двое - с опухолью языка, один - назофаринкса, один - с опухолью матки, один - с опухолью груди. Или всего контрольная группа имела одиннадцать пациентов, которые были подвергнуты только лучевой терапии.

МЕТОДЫ
    * Выживаемость
Мы проследили выживаемость у мышек на 3-ий , 7-ой,  16-тый , 23-тий , 30-тый день после облучения 10 Gy гамма - лучами, при профилактической и терапевтической схеме применения GS.

    * Эндогенные селезеночные колонии /Е - КОЕ g/ мы определили по методу J. Till, Е. Мс. Kulloch, L. Siminovitch. Мы использовали пять групп мышей, в каждой из которых было по 20 животных. Мы применяли превентивно 5 дней подряд GS в следующих дозах: I группа - 30 mg/kg телесной массы, II группа - 20 mg/kg, III группа - 10 mg/kg, IV группа - 5 mg/kg и V – контрольная группа, которую мы поили дистиллированной водой. На пятый день облучили 10 Gy гамма - лучами, а на восьмой день после облучения удалили селезенки, на которых подсчитали эндогенные селезеночные колонии.

    * Прослеживание гематологических показателей периферической крови: лейкоцитов, гранулоцитов, лимфоцитов, тромбоцитов у самцов крыс породы "Вистар" с телесной массой 150 - 170 g. GS профилактически давался пять дней подряд в дозе 5 mg/kg телесной массы, после чего мы облучили с 4 Gy рабочую и контрольную группу. Мы проследили гематологические показатели в динамике. Фагоцитарная активность определена в маркированной по 14С    20-часовой  культуре  Echerichia coli  культивированной в монослой /8/   14 С. Echenchia coli была получена после инкубации бактериальной культуры в питательную среду Тимакова, содержащую в качестве радиоактивных маркеров 14 С тимин и 14 С аценин. Производится изоляция нейтрофилов через NH4Cl - изотопический раствор, после чего следует трёхкратное градиентное центрифугирование и промывание клеточной суспензии раствором Henk's. Полученные нейтрофилы имеют сохраненный виталитет. Инкубация осуществляется за 1 час при температуре 37° С в соотношении нейтрофилы / Echerichta coli  - 1: 10, после чего не включенная в монослой активность устраняется путем четырехкратного промывания физиологическим раствором. Лизис клеток осуществляется 0.15 % сульфатом натриевого лаурила, добавляется сцинтилляционный коктейль и измеряется ?-активность жидким сцинтилляционным счетчиком. Фагоцитоз вычисляется в процентах от исходной активности для 1.106 клеток.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
В рабочей и контрольной группе находятся по 20 подопытных животных. Рабочую группу мы поили GS по 30 mg/kg телесной массы пять дней подряд до и после облучения с 3 Gy, а контрольную группу поили дистиллированной водой.

I. Эффект от GS на выживаемость мышей после острого облучения.
Результаты прослеживаемой выживаемости мышей показывают статистически достоверную разницу у профилактически третированной группы на 16-тый , 23-тий , 30-тый день после облучения. Вероятнее всего это обязано трем факторам: стимуляции гемопоэза /все клеточные ряды/, наличию мощных антиоксидантов, таких как флавоноиды, антоцианы, полифенольные кислоты и др. и повышенной фагоцитарной активности нейтрофилов (на 30-тый день выживающие третированные профилактически животные составляют 63% ±5.1%, а контрольная группа -  33% ±4.5% ).
У терапевтически третированной группы статистически достоверную разницу мы получили на 16-тый  день. В подопытной группе выжившие животные составляют 55% ±5.3%, а в контрольной 38% ±4.6% .


II. Прослеживание эндогенных селезеночных колоний /Е-КОЕд/
В І-вой группе, для которой мы применяли GS в дозе 40 mg/kg телесной массы мы получили среднее количество Е-КОЕд 7.17 ±1.34, во II-рой группе с дозой 30 mg/kg  - 6.57 ±0.83, в ІІІ-ей группе с дозой  20 mg/kg - 3.29 ±0.41 и в IV'™ группе с дозой 10 mg/kg - 1.80±0.33. У контрольной группы мы не обнаружили селезеночных колоний. Препарат вероятно или помогает большему сохранению стволовых клеток после облучения или ускоряет их пролиферацию или модифицирует оба процесса, что приводит к более быстрому восстановлению кроветворения после облучения./1/

III. Эффект от GS на гемопоэз у крыс породы "Вистар".
Мы проследили в динамике показатели крови, а именно лейкоцитов, гранулоцитов, лимфоцитов и тромбоцитов. Мы поили с GS подопытную группу животных по 5 mg/kg телесной массы, после чего облучили в гамма-облучателе с 4 источниками 60Со в дозах 4 Gy (экстраполяционный коэффициент крысы/мышки - 0.157). В первые 10 дней после облучения лейкоциты у рабочей группы более высокие, чем у контрольной группы, а на 23-ий день разница становится статистически достоверной. Тромбоциты у третированной группы имеют более высокие стоимости, чем у контрольной группы, с исключением результата 5-го дня. Здесь мы не открыли статистически достоверную разницу.